王军民，孔丽宇，黄月昌，丁思宇，韩丽琴*
（1.吉林医药学院附属医院，吉林 吉林 132011；
2.吉林医药学院，吉林 吉林 132013）
参松养心胶囊是以《黄帝内经》 络病学理论为基础，用以治疗心律失常等心血管类疾病的中成药［1］，主要由人参、麦冬、山茱萸、丹参等药材组成，具有通络疏血、清心安神功效［2］，与传统西药联用疗效更佳［3］，并且副作用小［4］。目前，关于参松养心胶囊的研究大多是临床病例方面［5-8］，而对其化学成分、药效物质基础鲜有关注［9-13］。
前期报道，毛蕊异黄酮具有保护心脑血管的作用［14］；
槲皮素在治疗心血管疾病方面具有重要作用［15］；
芍药苷具有抗心肌缺血的作用，在治疗老年慢性呼吸道疾病过程中也能发挥出良好效果［16］；
阿魏酸可减少血小板5-羟色胺释放［17］，广泛应用于治疗心脑血管疾病，并且上述成分也是参松养心胶囊主要活性物质。因此，本实验建立HPLC 法同时测定参松养心胶囊中绿原酸、芍药苷、阿魏酸、槲皮素、毛蕊异黄酮的含量，以期为该制剂质量控制提供参考。
1.1 药物 参松养心胶囊共2 批，批号分别为Z20030058、Z20103032，购自北京以岭药业有限公司。
1.2 仪器 LC-20HT 高效液相色谱仪、SPDM20A 电二极管阵列紫外可见光检测器（230 V）（日本岛津公司）；
CPA225D 型电子分析天平（德国赛多利斯公司）。
1.3 试剂 阿魏酸（批号B20007，纯度98%）、芍药苷（批号B21148，纯度95%）、毛蕊异黄酮（批号B20847，纯度98%）、槲皮素（批号B20527，纯度98%）、绿原酸（批号B20782，纯度96%）对照品均购自上海源叶生物科技有限公司。乙腈为色谱纯［赛默飞世尔科技（中国）有限公司］；
磷酸为色谱纯（辽宁泉瑞试剂有限公司）；
其余试剂均为分析纯。
2.1 色谱条件 Diamonsil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；
流动相乙腈（A）-0.1%磷酸（B），梯度洗脱，程序见表1；
体积流量1.0 mL／min；
柱温30 ℃；
检测波长238 nm；
进样量20 μL。
表1 梯度洗脱程序Tab.1 Gradient elution programs
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液 精密称取槲皮素、芍药苷、阿魏酸、毛蕊异黄酮、绿原酸对照品各1 mg，置于5 mL 量瓶中，少量甲醇超声溶解后定容，即得（质量浓度分别为10、25、4、50、100、200 μg／mL）。
2.2.2 供试品溶液 精密称取本品内容物0.406 5 g，置于磨口锥形瓶中，加入10 mL 甲醇，密塞，称定质量，在25 ℃下超声（100 Hz、500 W）处理30 min，冷却至室温，甲醇补足减失的质量，12 000 r／min离心5 min，取上清液，即得。
2.3 方法学考察
2.3.1 系统适用性试验 取对照品、供试品溶液适量，在“2.1” 项色谱条件下进样测定，结果见图1。由此可知，各成分分离度均大于1.5，表明该方法系统适用性良好。
图1 各成分HPLC 色谱图Fig.1 HPLC chromatograms of various constituents
2.3.2 线性关系考察 取“2.2.1” 项下对照品溶液适量，在“2.1” 项色谱条件下进样测定。以对照品质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）进行回归，结果见表2，可知各成分在各自范围内线性关系良好。
表2 各成分线性关系Tab.2 Linear relationships of various constituents
2.3.3 精密度试验 取同一份供试品溶液适量，在“2.1” 项色谱条件下进样测定6 次，测得绿原酸、芍药苷、阿魏酸、毛蕊异黄酮、槲皮素峰面积RSD 分别为1.27%、2.74%、2.31%、2.03%、2.44%，表示仪器精密度良好。
2.3.4 重复性试验 取同一份供试品溶液6 份，在“2.1” 项色谱条件下进样测定，测得绿原酸、芍药苷、阿魏酸、毛蕊异黄酮、槲皮素峰面积RSD 分别为1.83%、2.68%、2.08%、2.70%、2.49%，表明该方法重复性良好。
2.3.5 稳定性试验 取同一份供试品溶液，于0、2、4、6、8、10、12 h 在“2.1” 项色谱条件下各进样20 μL 测定，测得绿原酸、芍药苷、阿魏酸、毛蕊异黄酮、槲皮素峰面积RSD 分别为0.80%、2.04%、1.27%、1.01%、2.91%，表明溶液在12 h内稳定性良好。
2.3.6 加样回收率试验 取本品（批号Z20103032）6 份，每份约0.2 g，精密称定，加入适量对照品溶液，按“2.2.2” 项下方法制备供试品溶液，在“2.1” 项色谱条件下进样测定，计算回收率。结果，绿原酸、芍药苷、阿魏酸、毛蕊异黄酮、槲皮素平均加样回收率分别为95.48%、99.06%、96.92%、95.00%、96.75%，RSD 分别为0.81%、0.47%、1.40%、2.22%、1.72%。
2.3.7 样品含量测定 取2 批样品，按“2.2.2”项下方法平行制备6 份供试品溶液，在“2.1” 项色谱条件下进样测定，计算含量，结果见表3。
表3 各成分含量测定结果（mg／g， n＝6）Tab.3 Result of content determination of various constituents（mg／g， n＝6）
3.1 检测波长选择 本实验采用光电二极管阵列紫外可见光检测器，在210～400 nm 波长处进行扫描。结果，毛蕊异黄酮在254、230 nm，芍药苷在238 nm，槲皮素、绿原酸在220、334 nm，阿魏酸在322 nm 处均有最大吸收。为了保证各成分均有适宜的灵敏度［18］并减少干扰，最终选择238 nm 作为检测波长。
3.2 供试品溶液制备方法选择 本实验考察了提取溶剂50%、75%、90% 甲醇及无水甲醇，发现90%甲醇提取效果最佳。再考察了超声时间20、30、40、60 min，发现在40 min 时各成分提取率最高。
3.3 流动相比例选择 本实验选择乙腈-0.1% 磷酸作为流动相，考察乙腈不同初始体积分数（19%、27%、40%）对分离效果的影响，发现在19%时绿原酸、芍药苷、阿魏酸分离效果较差，尤其是绿原酸、芍药苷，两者色谱峰分离度小于1.5，而且其出峰时间均在5 min 内，容易与溶剂杂质峰重合。最终，选择乙腈初始体积分数为10%并梯度洗脱（10%、19%、25%、28%），此时该成分色谱峰分离度良好。
本实验建立HPLC 法同时测定参松养心胶囊中阿魏酸、芍药苷、槲皮素、绿原酸、毛蕊异黄酮的含量，该方法操作简便，重复性、稳定性良好，可用于该制剂的质量控制。
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