杨 迪 张 翼 张卫红
骨肉瘤属于一类来源于间叶组织的恶性肿瘤，早期阶段患者临床症状不明显，但是此类疾病恶性程度高，尽早进行诊断，可以有效提高患者生存率。基于分子水平，探讨骨肉瘤疾病的发生机制，积极寻找早期诊断生物指标，属于目前研究热点之一。骨肉瘤疾病的发病机制尚且无确切说明，但是大部分研究学者表示其与多基因作用有关。转铁蛋白受体1(TfR1)属于一类细胞膜相关糖蛋白，主要功能为参与细胞内铁的摄取过程，尤其在铁代谢过程中具有重要作用。铁元素可参与机体DNA合成、氧运送等过程，说明铁元素在细胞代谢等过程具有重要作用。正常生理情况下，TfR1主要介导内吞作用完成铁元素的摄取。相关研究称，TfR1蛋白在多种肿瘤疾病中均存在表达上调现象，如宫颈癌[1]、子宫内膜癌[2]、胶质瘤[3]等。研究证实[4]，铁螯合剂可以抑制多种肿瘤细胞的生长，表明TfR1属于铁代谢中重要蛋白之一，且与肿瘤进展有关。血管生成在肿瘤疾病发生和发展中具有重要作用。血管内皮生长因子(VEGF)属于血管生产关键刺激因子，研究发现[5]，肿瘤发生和发展中，VEGF过表达尤其重要，且进一步发现骨肉瘤患者预后差与VEGF高表达存在关系。肾上腺髓质素(ADM)具有血管舒张效应。近年来，有研究显示[6]，ADM具有促血管生成作用，另外也有研究报道[7]，ADM具有促进肿瘤生长的作用。ADM在前列腺癌、乳腺癌等疾病中均存在高表达，但在骨肉瘤疾病中的研究较少。本次研究主要探讨ADM、TfR1、VEGF在骨肉瘤组织中的表达及与预后关系，明确其是否可作为预测预后指标，内容如下。
1.1 一般资料
收集2018年1月至2019年10月在我院就诊的骨肉瘤患者60例，所有患者均同意手术治疗。
纳入标准：①均符合骨肉瘤疾病诊断标准，且均经过病理证实为骨肉瘤；
②手术治疗前均无其他抗肿瘤治疗史，如放化疗及免疫抑制剂治疗等；
③入院资料均完整；
④具有石蜡标本。排除标准：①伴有其他恶性肿瘤疾病史者；
②手术治疗期间死亡者；
③心、肺等重要脏器功能不全；
④合并自身免疫系统类疾病者。
60例骨肉瘤患者中男性22例，女性38例，平均年龄(15.9±2.6)岁，平均肿瘤大小(5.81±1.02)cm，组织分化：高分化51例、中低分化9例，转移22例，Enneking分期：低度危险44例、高度危险16例。
1.2 免疫组织化学染色法
手术中获取癌组织及癌旁组织，予以适量的4%甲醛溶液固定，石蜡包埋，切片，厚度为4 μm即可，再予以适量的PBS溶液修复抗原，再予以DAB溶液显色，苏木精溶液复染，将蛋白表达为阳性切片作为阳性对照组，将仅含有PBS溶液的切片作为阴性对照组，脱水、透明及显微镜观察。
结果判定：主要依据细胞染色百分比及染色的强度评分。①细胞染色的评分：0分表示染色细胞百分比<1%；
1分表示染色细胞百分比为1%～25%；
2分表示染色细胞百分比为25%～50%；
3分表示染色细胞百分比为51%～80%；
4分表示染色细胞百分比为>80%。②细胞染色的强度：0分表示无染色标记；
1分表示淡黄色标记；
2分表示棕黄色染色标记；
3分表示棕褐色染色标记。最终评分为细胞染色的评分与细胞染色的强度评分乘积，0～3分表示低表达；
4～7分表示中表达；
>7分表示高表达。
1.3 统计学方法
SPSS25.0软件统计整理，ADM、TfR1、VEGF蛋白阳性表达率均以%表示，组间比较进行χ2检验，P<0.05表示组间存在意义。Pearson相关性分析ADM、TfR1、VEGF蛋白表达的关系，并进行Kappa检验；
Kaplan-Meier法分析患者累积生存率。
2.1 ADM、TfR1、VEGF在骨肉瘤组织中的表达
癌组织ADM、TfR1、VEGF表达(78.33%、73.33%、76.67%)均显著高于癌旁组织，差异均具有统计学意义(χ2=48.348、34.286、51.400，P均<0.05)。见表1。
表1 ADM、TfR1、VEGF在骨肉瘤组织中的表达(例，%)
2.2 骨肉瘤组织中ADM、TfR1、VEGF中高表达与临床病理参数的关系
骨肉瘤组织中ADM、TfR1、VEGF表达均与组织分化、是否转移以及Enneking分期有关(P<0.05)，但与性别、肿瘤大小均无关(P>0.05)。见表2。
表2 骨肉瘤组织中ADM、TfR1、VEGF中高表达与临床病理参数的关系(例，%)
2.3 骨肉瘤组织中ADM、TfR1、VEGF表达与临床预后的关系
ADM、TfR1、VEGF中高表达组患者2年累积存活率均显著低于低表达组(P<0.05)。见图1、图2、图3。
图1 ADM表达与骨肉瘤患者预后
图2 TfR1表达与骨肉瘤患者预后
图3 VEGF表达与骨肉瘤患者预后
2.4 骨肉瘤组织中ADM、TfR1、VEGF表达的相关性
ADM蛋白表达分别与TfR1、VEGF蛋白表达呈正相关(γ=0.621，γ=0.553，P均<0.05)，TfR1蛋白表达与VEGF蛋白表达呈正相关(γ=0.671，P<0.05)。见表3。
表3 骨肉瘤组织中ADM、TfR1、VEGF表达的相关性
TfR1在多种肿瘤疾病中均存在高表达，如结肠癌[8]、胰腺癌[9]、淋巴瘤[10]等。与正常细胞比较，TfR1表达较高的细胞铁吸收率更高。大多数研究均表示，TfR1因子表达可预测患者预后，如翟勇等的研究中[11]，TfR1表达与乳腺癌患者预后有关，且其高表达患者中预后恢复更差。而本次研究结果也表明，TfR1在骨肉瘤癌组织内的表达明显上调，与目前研究报道结果具有一致性，提示TfR1在骨肉瘤疾病发生和发展中具有重要作用。同时进一步发现，TfR1表达与组织分化、远处转移、以及Enneking分期存在关系，且存在远处转移、组织分化程度低及Enneking分期高的组织中表达明显更高，说明TfR1可参与骨肉瘤疾病进展、侵袭及迁移等过程。观察TfR1低表达组与中高表达组比较，低表达组生存率显著更高，说明通过检测TfR1表达，可以检测患者预后恢复情况。
VEGF属于特异性高的促血管内皮生长的因子，其表达水平是检测血管生成疾病的重要指标。研究称[12]，肿瘤血管生成是多种肿瘤患者预后因素，VEGF可以通过诱导血管生成，进而参与细胞侵袭、增殖等多种生物学行为。另外研究报道[13]，VEGF与骨肉瘤分化程度、组织分化及肿瘤分期存在关系。而本次研究结果显示，VEGF也与组织分化、是否转移以及Enneking分期有关，与本次研究具有一致性。同时本研究发现，骨肉瘤癌组织中VEGF表达较高，且高表达骨肉瘤患者预后较差，此项研究进一步表明VEGF与骨肉瘤进展、侵袭以及转移等有关。
多项研究表明，ADM参与多种肿瘤疾病，如Zhang等的研究[14]，与正常人群比较，骨肉瘤患者ADM水平明显更高。另外Li等的研究显示[15]，卵巢上皮癌患者临床病理参数如临床分期与ADM表达有关，且分期越晚，ADM表达越高。又如Bozkurt等研究称[16]，ADM表达与组织分化有关，且分化程度高，ADM表达越低。而本次研究结果也显示，ADM在骨肉瘤癌组织表达更高，且与分化程度、组织分化及肿瘤分期有关，与目前研究报道一致。ADM表达越高，预后越差，表明ADM也参与骨肉瘤进展，且可能在其转移及生长过程中具有重要作用。相关性分析显示，ADM、TfR1、VEGF之间均存在正相关性，说明三者均可能在骨肉瘤疾病中存在协同作用。
综上所述，ADM、TfR1、VEGF在骨肉瘤组织中阳性表达率较高，且与骨肉瘤患者预后有关，通过检测上述指标可以预测患者预后，同时也可作为此类疾病治疗靶点。
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