邢玉微,孙泽楠,柴雪姣,位 庚
(河北省石家庄市第二医院内分泌科,河北 石家庄 050000)
2型糖尿病(type 2 diabetes,T2DM)是一种慢性、非传染性、多系统疾病,已达到流行程度。T2DM患者的长期高血糖会影响微血管系统,最终导致糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)、视网膜病变和神经病变等微血管并发症［1］。其中DN是导致终末期肾病的重要原因,是世界范围内公认的公共卫生问题,特别是我国T2DM患者中DN患病率较高,为21.8%,已成为T2DM患者治疗成本和病死率增加的主要因素［2-3］。由于DN起病隐匿、发展缓慢,临床近年来积极探索DN早期生物学标志物以诊断DN。国外研究显示,微小RNA(microRNA,miR)在DN中的表达异常,可作为DN严重程度的预测因子［4］。国内研究［5-6］显示,血清miR-92b-5p水平降低、miR-148b-3p水平升高均为DN发生的危险因素,两种因子均可作为DN诊断的潜在生物标志物。但miR-92b-5p、miR-148b-3p在T2DM进展至DN过程中的水平变化和交互作用尚未明确。基于此,本研究重点探讨T2DM进展至DN过程中血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平变化和交互作用,旨在为临床防治DN提供参考。
1.1一般资料 选取2018年3月—2022年3月我院T2DM患者400例为研究对象,其中非DN200例作为T2DM组,DN患者200例作为DN组。纳入标准:①所有患者均符合T2DM诊断标准［7］;②DN组符合DN诊断标准［8］:以尿白蛋白/肌酐(urinary albumin creatinine ratio,UACR)≥30 mg/g或尿蛋白排泄率≥30 mg/24 h为标准,且在3～6个月内重复检查UACR或尿蛋白排泄率3次,达到或超过临界值≥2次;④患者知晓本研究,已签署同意书。排除标准:①肾结石或泌尿系统感染;②恶性肿瘤;③全身性疾病如系统性红斑狼疮和血管炎;④在诊断T2DM前确诊的慢性肾脏疾病;⑤狼疮性肾炎或过敏性紫癜性肾炎;⑥严重肝病或甲状腺疾病;⑦怀孕或哺乳期女性;⑧合并大血管病变如冠心病、脑血管病和下肢血管病变。
本研究通过医院伦理委员会批准。
1.2方法 诊断为T2DM肾功能正常时或DN时收集资料。采集患者晨起空腹静脉血10 mL,取5 mL血液标本采用au5800全自动生化分析仪(美国贝克曼)检测血糖、糖化血红蛋白、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,SCr)、尿酸(uric acid,UA)水平,并检测DN组尿微量白蛋白/肌酐(albumin creatinine ratio,ACR)水平。血清miR与化验血生化时同时检测,取5 mL血液标本离心处理5 min(半径8 cm,转速3 500 r/min)取血清,采用实时荧光免疫PCR检测血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平:采用RNA提取试剂盒(北京索莱宝科技)提取总RNA,随后采用逆转录试剂盒(美国Promega公司)逆转录为cDNA,采用7300实时PCR检测系统(美国应用生物)和PCR试剂盒(北京华夏远洋科技)进行扩增。miR-92b-5p上游引物5′-AGGGACGGGACGCGG-TGCAGTG-3′,下游引物5′-GCGAFCACAGAAT-TAATACGAC-3′,循环条件:95 ℃ 30 s,95 ℃ 5 s,60 ℃ 34 s,40个循环。miR-148b-3p上游引物5′-GGGTCAGTGCATCACAGAA-3′,下游引物5′-CAGTGCGTGTCGTGGAG-3′,循环条件:95 ℃ 10 s,60 ℃ 60 s、95 ℃ 15 s,40个循环。以U6为内参基因,其上游引物5′-CTCGCTTCGGCAG-CACATATACT-3′,下游引物5′-ACGCTTCACG-AATTTGCGTGTC-3′。引物均由上海生工生物工程股份有限公司合成。应用公式2-△△ct计算血清miR-92b-5p、miR-148b-3p相对表达水平(△ct=ct目标-ct内参,△△ct=△ct实验-△ct对照)。
1.3观察指标 ①DN组和T2DM组临床资料(性别、年龄、体重指数、T2DM病程、吸烟史、饮酒史、收缩压、舒张压、血糖、糖化血红蛋白、HDL-C、LDL-C、TC、TG、BUN、UA)、血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平。②DN组不同分期患者血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平,UACR水平30～299.99 μg/mg、估算肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,eGFR)≥90 mL·min-1·1.73 m-2判断为早期,UACR水平≥300 μg/mg、eGFR <90 mL·min-1·1.73 m-2为临床期。
1.4统计学方法 应用SPSS 22.0统计软件分析数据。计数资料比较采用χ2或fisher精确概率法检验。计量资料比较采用t检验。采用Spearman分析分析DN组血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平与临床分期的相关性。通过交互作用分析T2DM进展至DN过程中血清miR-92b-5p与miR-148b-3p的作用,交互作用系数γ<1时呈负向交互作用,当γ=1时无交互作用,当γ>1时呈正向交互作用;当交互作用OR大于两单独因素OR值的乘积时为超相乘模型,小于两单独因素OR值的乘积时为次相乘模型,等于两单独因素OR值的乘积-1时为相加模型。采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评价血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平预测DN的价值。P<0.05为差异有统计学意义。
2.1临床资料及血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平 DN组与T2DM组性别、年龄、体重指数、T2DM病程、吸烟史、饮酒史、收缩压、舒张压、血糖、糖化血红蛋白、HDL-C、LDL-C、TC、TG、BUN、UA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);DN组血清SCr、miR-148b-3p水平较T2DM组高,eGFR及血清miR-92b-5p水平较T2DM组低(P<0.05)。见表1。
表1 临床资料及血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平Table 1 Clinical data and serum miR-92b-5p and miR-148b-3p levels
表1 临床资料及血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平Table 1 Clinical data and serum miR-92b-5p and miR-148b-3p levels
组别性别(例数,%)男性女性年龄(岁)体重指数T2DM病程(年)吸烟史(例数,%)饮酒史(例数,%)收缩压(mmHg)DN组122(61.00)78(39.00)61.28±9.3124.26±2.269.18±2.8548(24.00)35(17.50)140.23±19.67T2DM组115(57.50)85(42.50)59.84±8.8423.95±2.118.67±2.7939(19.50)26(13.00)137.94±17.22 χ2/t值0.5071.5861.4181.8081.1901.5671.239 P值0.4760.1140.1570.0710.2750.2110.216 组别舒张压(mmHg)血糖(mmol/L)糖化血红蛋白(%)HDL-C(mmol/L)LDL-C(mmol/L)TC(mmol/L)TG(mmol/L)DN组79.11±14.509.29±3.077.71±2.561.09±0.342.54±0.824.12±1.352.30±0.76T2DM组77.62±12.838.80±2.917.30±1.981.16±0.382.63±0.863.93±1.282.19±0.69 χ2/t值1.0881.6101.7921.9421.0711.4441.516 P值0.2770.1080.0740.0530.2850.1500.130 组别BUN(mmol/L)SCr(μmol/L)eGFR(mL·min-1·1.73 m-2)UA(μmol/L)miR-92b-5pmiR-148b-3pDN组5.62±2.3183.64±23.17115.57±22.69317.60±89.572.31±0.480.67±0.12T2DM组5.29±1.7455.60±15.33136.24±28.79304.12±68.953.27±0.610.51±0.10 χ2/t值1.61414.2737.9751.68717.49114.486 P值0.107<0.001<0.0010.093<0.001<0.001
表2 DN组不同分期患者血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平Table 2 Serum miR-92b-5p and miR-148b-3p levels in patients with different stages in the DN group
表2 DN组不同分期患者血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平Table 2 Serum miR-92b-5p and miR-148b-3p levels in patients with different stages in the DN group
临床分期例数miR-92b-5pmiR-148b-3p早期 1422.51±0.530.63±0.10临床期581.82±0.400.77±0.15t值8.9267.704P值<0.001<0.001
1 mmHg=0.133 kPa
2.2DN组不同分期患者血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平 DN组临床分期早期142例,临床期58例。临床期患者血清miR-148b-3p水平较早期患者高,血清miR-92b-5p水平较早期患者低,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。
2.3DN组血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平与临床分期的相关性 DN组血清miR-92b-5p水平与临床分期呈负相关关系(r=-0.624,P=0.037),血清miR-148b-3p水平与临床分期呈正相关关系(r=0.571,P=0.021)。
2.4T2DM进展至DN过程中血清miR-92b-5p与miR-148b-3p的交互作用 以所有患者血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平平均值为界,分为低表达(<平均值)和高表达(≥平均值),通过交互作用分析显示,miR-92b-5p低表达与miR-148b-3p高表达在T2DM进展至DN过程中呈正向交互作用,差异有统计学意义(P<0.05),且均为次相乘模型。见表3。
表3 T2DM进展至DN过程中血清miR-92b-5p与miR-148b-3p的交互作用Table 3 Interaction of serum miR-92b-5p with miR-148b-3p during the progression of T2DM to DN
2.5血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平预测DN的价值 以DN组为阳性样本,T2DM组为阴性样本,绘制miR-92b-5p、miR-148b-3p预测T2DM进展至DN的ROC曲线,结果显示miR-92b-5p、miR-148b-3p预测的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.840、0.812,二者联合预测的AUC最大,为0.911。见表4、图1。
图1 血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平预测DN的ROC曲线
表4 血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平预测DN的价值Table 4 Value of serum miR-92b-5p and miR-148b-3p levels in predicting DN
T2DM进展至DN是由多种因素综合作用所致,包括血糖控制不佳、脂肪代谢异常、肾脏结构和功能异常等［9-10］。由于DN早期是可逆的,因此在T2DM早期积极预防DN比DN的治疗更为重要［11］。DN发病机制复杂,常规检测手段存在一定的局限性,如微量白蛋白尿是DN常规筛查的早期标志物,但即使没有微量白蛋白尿,也可能发生肾脏损害［12］。因此临床亟需早期识别和防治DN的标志物。
近年来miR在DN发生发展中的作用越来越受临床关注,且miR稳定于血清中,血清miR检测能辅助临床医生了解DN的发生机制,并为DN的早期预测和诊断提供了新方法［13-14］。相关研究［15-16］显示,miR-92b在肾脏多种病理生理过程中发挥作用,如能减少阿霉素诱导的肾病中的肾水肿。动物学研究［17］显示,miR-92b-5p具有靶向下调高迁移率族蛋白B1水平的作用,从而抑制DN大鼠炎症反应,减轻肾损伤。本研究显示DN患者血清miR-92b-5p水平明显低于T2DM患者,说明miR-92b-5p可能与DN的发生有关。其原因可能在于血清miR-92b-5p水平降低可导致高迁移率族蛋白B1表达上调,高迁移率族蛋白B1是由活化肾脏细胞释放的炎性因子,具有促炎作用,其表达水平升高可引起并加重肾小管间质炎症,从而导致肾损伤,最终促进T2DM进展至DN［5］。进一步通过相关性分析显示DN患者血清miR-92b-5p水平与临床分期呈负相关,说明血清miR-92b-5p水平降低导致肾损伤加重,最终导致DN病情加重。
此外,Ghoreishi等［18］显示T2DM患者血清miR-148b-3p处于明显高表达状态,检测其血清水平在T2DM中具有潜在的诊断用途。在上述研究基础上,本研究进一步深入分析显示,DN患者血清miR-148b-3p水平明显高于T2DM患者,提示miR-148b-3p可能参与DN的发生。有证据［19］表明miR-148b-3p表达水平升高能加重炎症反应,促进肾损伤进展,因此血清miR-148b-3p水平升高能促进T2DM向DN进展。崔兆山等［20］研究也显示DN患者血清miR-148b-3p水平明显高于糖尿病和体检健康者,并指出miR-148b-3p参与DN的发生发展。支持本研究结果结论。本研究还显示,DN患者血清miR-148b-3p水平与临床分期呈正相关,进一步说明血清miR-148b-3p水平升高可导致肾损伤加重,促进DN的病情进展。但miR-148b-3p在DN发生发展中的具体作用机制尚未明确,未来工作中仍需进一步深入探讨。
本研究通过交互作用分析显示,在T2DM进展至DN过程中血清miR-92b-5p低表达与miR-148b-3p高表达呈次相乘模型的正向交互作用。说明血清miR-92b-5p低表达与miR-148b-3p高表达可相互影响,共同促进T2DM向DN进展。原因考虑为血清miR-92b-5p水平降低、miR-148b-3p水平升高均能加重肾损伤,从而促进DN发生。此外,血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平预测T2DM进展至DN的AUC分别为0.840、0.812,二者联合预测的AUC最大,为0.911,说明血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平检测在DN早期预测方面具有良好效能,早期检测可指导临床评估T2DM进展至DN的风险,从而指导临床制定相关干预措施。
综上可知,在T2DN进展至DN过程中血清miR-92b-5p水平降低、miR-148b-3p水平升高,miR-92b-5p低表达、miR-148b-3p高表达共同促进T2DM向DN进展,早期检测有助于预测DN发生风险。
猜你喜欢进展引物预测DNA引物合成起始的分子基础广东药科大学学报(2022年3期)2023-01-04高中生物学PCR技术中“引物”相关问题归类分析生物学通报(2022年1期)2022-11-22无可预测黄河之声(2022年10期)2022-09-27选修2-2期中考试预测卷（A卷）中学生数理化(高中版.高二数学)(2022年4期)2022-05-25选修2-2期中考试预测卷（B卷）中学生数理化(高中版.高二数学)(2022年4期)2022-05-25Micro-SPECT/CT应用进展现代仪器与医疗(2021年4期)2021-11-05SSR-based hybrid identification, genetic analyses and fingerprint development of hybridization progenies from sympodial bamboo (Bambusoideae, Poaceae)南京林业大学学报（自然科学版）(2021年5期)2021-10-13不必预测未来，只需把握现在中学生数理化·八年级物理人教版(2017年11期)2017-04-18火炬松SSR-PCR反应体系的建立及引物筛选广西林业科学(2016年3期)2016-03-16寄生胎的诊治进展疑难病杂志(2014年12期)2014-04-16