周迎春，段倩倩，王 倩，王 军，王 维，沈 艳，刘 华，苗文萍，何长生，朱良强
（安徽省动物疫病预防与控制中心，安徽合肥 230091）
猪圆环病毒（porcine circovirus，PCV）属于圆环病毒科圆环病毒属，为小型、无囊膜、无血凝活性的单链环状DNA 病毒，可引起断乳仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎肾病综合征、仔猪先天震颤等，给养殖业造成严重经济损失。目前PCV有4 种基因型，分别为猪圆环病毒1 型（porcine circovirus type 1，PCV1）、猪圆环病毒2 型（porcine circovirus type 2，PCV2）、猪圆环病毒3 型（porcine circovirus type 3，PCV3）和猪圆环病毒4 型（porcine circovirus type 4，PCV4），其中PCV2 和PCV3 感染症状相似，与猪皮炎肾病综合征、呼吸系统疾病、繁殖障碍、多系统炎症、仔猪腹泻、中枢神经系统疾病关系密切，已在我国多个省份广泛流行[1-3]。库旭钢[4]对2016—2021 年采自全国537 个猪场的2 894 份疑似PCV 感染样品进行检测，发现PCV2和PCV3 感染率分别为34.45%和24.95%，混合感染率为12.72%。洪伟鸣等[5]对2017—2018 年在华东地区规模化猪场采集的210 份临床样品进行检测，发现PCV2 阳性率高达90.0%。在早年报道中，安徽省猪圆环病毒病（porcine circovirus associated disease，PCVAD）以PCV2 感染为主，且主要为PCV2b 和PCV2d 亚型，同时也存在PCV3 散发感染情况[6-7]。
为了解近年来安徽省PCVAD 流行情况，对2020—2022 年采集的950 份猪组织进行了PCV2和PCV3 病原检测，对650 份猪血清进行了PCV2抗体检测，以期为安徽省PCVAD 防控提供参考。
1.1 样品来源
2020—2022 年，在安徽省安庆市望江县、滁州市全椒县、阜阳市临泉县、六安市裕安区和金安区的11 个养殖场和2 个屠宰场于每年4～6 月开展1 次检测采样。2 个大型养殖场（存栏量≥5 000 头）每年采集健康猪血清和扁桃体各30～40 份，7 个中型养殖场（存栏量1 000～4 999 头）各采集20～30份，2 个小型养殖场（存栏量＜1 000 头）各采集10～20 份，血清和扁桃体一一对应；
2 个屠宰场每年采集颌下或腹股沟淋巴结样品各30～60 份。共采集650 份血清、650 份扁桃体和300 份淋巴结。所有养殖场均已按程序免疫PCV2 灭活疫苗。
1.2 主要试剂
磁珠法病毒核酸提取试剂盒、PCV2＆PCV3荧光PCR 检测试剂盒、PCV2 抗体ELISA 检测试剂盒，均购自哈尔滨元亨生物药业有限公司。
1.3 主要仪器
组织研磨仪（型号为JXFSTPRP-48），购自上海净信实业发展有限公司；
全自动核酸提取仪（型号为KingFisher 96），购自美国热电公司；
荧光定量PCR 仪（型号为CFX96），购自BIO-RAD公司；
酶标仪（型号为Sunrise），购自TECAN 公司。
1.4 抗体检测
使用PCV2 抗体ELISA 检测试剂盒对650 份血清进行检测。
1.5 病原检测
使用磁珠法病毒核酸提取试剂盒提取650份扁桃体和300 份淋巴结中的病毒核酸，使用PCV2＆PCV3 荧光PCR 检测试剂盒进行病毒核酸检测。
1.6 数据分析
使用SPSS 20.0 软件对数据进行单因素方差分析，采用Graphpad Prime 7.0 软件绘图。
2.1 抗体检测
2.1.1 不同年份PCV2 抗体检测 结果（图1）显示：2020—2022 年PCV2 抗体阳性率分别为66.16%、74.35%、91.74%，呈逐年升高趋势；
2022 年显著高于2020 和2021 年（P＜0.05），2020 和2021 年差异不显著（P＞0.05）。
图1 2020—2022 年PCV2 抗体阳性率（柱上方字母相同表示差异不显著（P ＞0.05），不同表示差异显著（P ＜0.05），下图同）
2.1.2 不同规模养殖场PCV2 抗体检测 结果（图2）显示：大、中、小型养殖场的PCV2 抗体阳性率分别为96.79%、72.18%、55.00%；
大型养殖场的PCV2 抗体阳性率显著高于中、小型养殖场（P＜0.05），中型养殖场显著高于小型养殖场（P＜0.05）。
图2 不同规模养殖场PCV2 抗体阳性率
2.2 病原检测
2.2.1 不同年份PCV2 和PCV3 病原检测 结果（图3）显示：2020—2022 年PCV2 感染率分别为57.81%、47.71%和48.57%，PCV3 感染率分别为10.63%、38.86%和32.14%。2020 年PCV2 感染率显著高于2021 和2022 年（P＜0.05），2021 和2022 年差异不显著（P＞0.05）；
2020 年PCV3感染率显著低于2021 和2022 年（P＜0.05），2021 和2022 年差异不显著（P＞0.05）；
同一年份的PCV2 感染率均显著高于PCV3（P＜0.05）。
图3 2020—2022 年PCV2 和PCV3 病原阳性率
2.2.2 不同环节PCV2 和PCV3 病原检测 结果（图4）显示：养殖场的PCV2 和PCV3 感染率分别为44.46%、18.46%，屠宰场分别为66.33%、46.67%；
屠宰场的PCV2 和PCV3 感染率均显著高于养殖场（P＜0.05）。
图4 不同环节PCV2 和PCV3 病原阳性率
2.2.3 不同规模养殖场PCV2 和PCV3 病原检测结果（图5）显示：大、中、小型养殖场的PCV2感染率分别为88.95%、25.25%、31.67%，PCV3感染率分别为16.32%、20.75%、10.00%。大型养殖场的PCV2 感染率显著高于中、小型养殖场（P＜0.05），中型和小型养殖场差异不显著（P＞0.05）；
大、中型养殖场的PCV3 感染率显著高于小型养殖场（P＜0.05），大型和中型养殖场差异不显著（P＞0.05）。
图5 不同规模养殖场PCV2 和PCV3 病原阳性率
3.1 PCV 流行情况与时间关系
本研究中，2020—2022 年安徽部分地区健康猪群中PCV2 抗体阳性率逐年升高，与之对应PCV2 病原阳性率整体呈下降趋势，但2022 年有小幅回升。一方面说明养殖户对PCV2 疫苗免疫重视程度高，免疫效果好，产生高水平免疫抗体，从而使感染率降低。另一方面，由于现有的抗体试剂盒尚无法区分疫苗免疫抗体和野毒感染抗体，本研究中所有PCV2 病原阳性生猪，抗体检测也均为阳性，其中既包含疫苗免疫抗体，也包含野毒感染抗体，因此抗体阳性率与感染率不完全呈负相关。此外，由于目前无PCV3 商品化疫苗，且PCV2 疫苗对于PCV3 感染无交互免疫力，PCV3 病原阳性率整体呈上升趋势，从10.63%上升至32.14%，但是同一年份的PCV3 病原阳性率均显著低于PCV2（P＜0.05），这与河南省部分地区报道[8]的流行情况一致。
3.2 PCV 流行情况与养殖规模关系
本研究中，大型养殖场的PCV2 抗体阳性率显著高于中、小型养殖场（P＜0.05），分析其原因，主要是由于大型养殖场对疫苗免疫的重视程度更高，也更容易推进开展集中免疫。同时，大型养殖场的PCV2 和PCV3 病原阳性率也高于中、小型养殖场。经分析，存在两方面原因：一是大型养殖场具有养殖数量多、饲养密度大、猪舍面积大、管理难度高等特点，一旦感染PCV，更易流行传播；
二是在非洲猪瘟暴发之后，猪价飙升，大型养殖场扩群、换种力度骤然加大，猪群流动频繁，因此PCV 感染风险更高。
3.3 PCV 流行情况与流通环节关系
本研究中，屠宰场生猪PCV2 和PCV3 的感染率均显著高于养殖场（P＜0.05），表明屠宰环节PCV 感染风险高。生猪养殖场大多建在农村和山区，环境相对偏远封闭，人员、物资流通受限，与外界病原之间存在物理屏障；
相比之下，屠宰场连接生猪产销，是高风险物流、车流和人流的集散地，并且生猪在流通过程中容易产生应激反应，疫苗保护效果逐渐减弱，因此对PCV2 更加易感。同时，PCV 可通过猪血球蛋白粉、血浆蛋白粉、肉骨粉等饲料原料从屠宰环节再次进入养殖环节，进一步加剧PCVAD 发生[9]。
近年来安徽省PCVAD 防控取得一定成效，但是PCV2 仍存在广泛感染，PCV3 愈加流行；
屠宰场的感染风险高于养殖场，大型养殖场的感染风险高于中、小型养殖场。建议持续做好PCV2 免疫工作，加强屠宰场的风险监测及大型养殖场的饲养管理和生物安全管理，严防PCV2 和PCV3 在养殖和屠宰环节流通传播。